En protokoll for området-regissert mutasjon og bygging av en vektor som inneholder mutasjon. A par homologe komplementære primere som inneholder mutasjon brukes separat med andre primere hver, med sin mutagene primer, brakett en unik begrensning-området for å konstruere to double-strandet oligonucleotides som overlapper bare over sekvens av mutagene primere. Disse double-strandet DNAs er blandet, denaturert og glødet å danne noen av en hybrid som er dobbel-strandet bare i sekvensen av mutagene primerne og single-strandet i retning som strekker seg mot de andre eksterne primer nettstedene. PCR forsterkning og begrensning fyller i full lengde DNA og forbereder det for innsetting i en vektor.